基于早筛助手管理平台的结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式的构建及应用研究

这是一篇关于结直肠癌,肿瘤筛查,一级亲属,配偶,微信小程序的论文, 主要内容为目的:1.通过横断面研究调查结直肠癌患者配偶及一级亲属的肠癌筛查依从性,并分析其影响因素,为构建结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式提供现实依据。2.设计和研发基于微信小程序的“早筛助手”管理平台,解决结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式中的技术及产品配置问题,同时提升医务人员的工作效率,改善结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛依从性。3.构建、应用结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式,为制定预防结直肠癌相关策略、提高肠癌的早期筛查依从性提供借鉴。方法:本研究共分为三部分:1.结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查依从性及影响因素分析采用便利抽样法,于2020年2月～5月选取重庆医科大学附属第一医院胃肠外科病房的340名结直肠癌患者的277名一级亲属和224名配偶为调查对象。由其配偶及一级亲属填写一般资料调查表、结直肠癌筛查高危因素量化问卷和中文版结直肠癌健康信念量表、结直肠癌知识、态度和行为调查问卷。最后,运用Student t检验,χ2检验和二元Logistic回归进行统计学分析。2.基于微信小程序的“早筛助手”管理平台的设计与研发结合目前结直肠癌常见的筛查方式及移动健康的流行趋势,基于微信标记语言(PHP)开发前端微信小程序,和Spring Boot框架开发后端云服务器,前后端数据遵循Java Script对象表示法(JSON)格式传输,完成系统的设计与开发。3.基于“早筛助手”管理平台的结直肠癌筛查模式的构建及应用研究本部分为类实验临床研究,将2021年2月-8月期间就诊于重庆某三甲医院胃肠外科的结直肠癌患者配偶及一级亲属纳入分析。在其陪护患者住院期间,研究者向配偶及一级亲属宣传结直肠癌筛查必要性,邀请其通过“早筛助手”参与结直肠癌筛查,通过初筛和复筛的方式,简化结直肠癌筛查流程,并于邀请1年后通过电话随访其行肠镜筛查的依从性。最后,采用χ2检验及Fisher精确检验对资料进行统计学分析,以评价该筛查模式的有效性。结果:1.共有340名结直肠癌患者的277名一级亲属及224名配偶接受问卷调查并纳入本次研究。参与结直肠癌筛查一级亲属有48人(17.3%),其中年龄≥40岁(p=0.023),经常参与体检(p=0.004),有慢性肠病史(p<0.001),愿意免费参与筛查(p=0.019),有结直肠癌多发家族史(p=0.005),结直肠癌筛查益处更高(p=0.021)以及对结直肠癌认知水平较高(p=0.005)是独立性影响因素,他们更愿意参与结直肠癌筛查。有超过一半的一级亲属对结直肠癌的认知处于中低水平(50.9%)。参与结直肠癌筛查的配偶人数为38人(17.0%),其中经常体检(p=0.017),有商业保险(p=0.022),有慢性肠病史(p=0.005),愿意参与免费筛查(p=0.024)及对肿瘤认知水平较高(p=0.017)是独立性影响因素,他们更愿意参与结直肠癌筛查。2.“早筛助手”系统开发过程简单安全有效,用户使用流程方便、接受度高、适用范围广,能够满足绝大多数人的健康需求,能有效地节约医疗资源,可以在临床工作中进行广泛应用。3.我们构建了基于“早筛助手”的结直肠癌筛查模式并在临床工作中进行初步应用。共有263名结直肠癌患者的225名一级亲属及158名配偶参与研究。排除中途退出及失访者,共有218名一级亲属及149名配偶领取FOBT试纸并纳入分析。其中FOBT试纸合格人数分别为207例(95.0%)和140例(94.0%),阳性人数分别为71例(32.6%)和43例(28.9%),1年内肠镜筛查人数分别为76名(34.5%)和46名(30.1%),病变检出人数分别为34例(44.7%)和18例(39.1%),结直肠癌配偶及一级亲属的肠癌筛查依从性明显提升。结论:1.结直肠癌患者配偶及一级亲属参与肠癌筛查依从性普遍较低,且影响因素涉及多个层面,应制订相应干预措施以加强对结直肠癌患者配偶及一级亲属参与肠癌筛查的管理,提高肠癌筛查依从性。2.“早筛助手”管理平台具备创新性、适宜性和科学性,简化了结直肠癌筛查流程,为满足结直肠癌早期筛查模式构建和应用的技术需要提供了支持。3.本研究开创的基于“早筛助手”管理平台的结直肠癌筛查模式能显著提升结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查依从性及病变检出率,基于外科病房的结直肠癌筛查策略能显著提升高风险人群的肿瘤筛查依从性。并为结直肠癌筛查管理提供了新途径,在未来的临床工作中可以进行广泛推广。

基于多示例学习的结直肠癌微卫星不稳定性分类研究与应用

这是一篇关于多示例学习,结直肠癌,微卫星不稳定性,图像分类,计算机辅助诊断的论文, 主要内容为近年来,随着人工智能技术的飞速发展,基于深度学习的计算机辅助诊断技术已成为医学领域的热门研究方向,它可以帮助医生从大量数据中快速发现异常组织区域,提高医生的诊断效率和准确率。微卫星不稳定性(Microsatellite instability,MSI)是结直肠癌诊断和预后判断的重要分子标志物,MSI的筛查具有非常重要的临床意义。在结直肠癌病理图像中,携带MSI的组织与其他病灶组织在形态上难以用肉眼识别,无法提供像素级别的标注,因此常见的有监督学习框架在对MSI进行分类时存在困难。弱监督学习框架也存在模型计算复杂度高、识别能力不强以及模型工程应用不足等问题。针对MSI病理图像处理实际,为提高MSI病理图像的识别准确率和模型应用,本文以深度学习模型改进为方向,开展一系列工作。具体工作如下:(1)针对弱监督学习框架中简单聚合操作导致决策边界迁移影响模型分类准确性的问题,提出基于多示例学习的弱监督结直肠癌MSI分类模型Codc Net。该模型先通过注意力池化,根据注意力分数选择正负样本,再通过加入一维卷积层对样本特征进行嵌入,引入更多的非线性以拉大类间距离,实现了降低模型复杂度、提高模型识别效率的目标。(2)为了进一步提高模型对MSI的分类性能,提出了基于双流多示例学习的结直肠癌MSI分类模型CNDSMIL。该模型采用双流架构,通过测量每个示例与得分最高的关键示例之间的距离训练得到分类器,再通过采用Codc Net模型替换α流的最大池化方法及改进β流关键示例的聚合方法,使用多损失函数组合方法对双流损失函数进行加权计算以得到更准确的决策边界。CNDSMIL还可以通过热力图的方式显示分类结果的高风险区域,提升了模型的可解释性。(3)针对模型工程应用不足的情况,设计了一种结直肠癌医学图像微卫星不稳定性预测系统。系统以Py Qt5技术为基础,包含用户登录、图像预处理、MSI分类等主要模块,实现了对结直肠癌病理图像进行微卫星不稳定性状态分析的功能。本文改进算法在典型数据集实验的验证中表现出了较好的分类性能,开发的结直肠癌医学图像微卫星不稳定性预测系统,较好地体现了算法与应用的有机结合,为相关技术的临床应用提供了良好支撑,具有一定的实际应用价值。

SELDI-TOF-MS联合蛋白质组学实验数据库对结直肠癌血清标志物的研究

这是一篇关于结直肠癌,血小板因子,生物学标记,表面增强基质辅助激光解析飞行时间质谱,蛋白质组学实验数据库的论文, 主要内容为研究背景与目的 目前,结直肠癌已上升为我国肿瘤发病率的第三位,约有1/ 3的患者治疗时已属晚期。现有的临床指标由于敏感性和特异性低,往往达不到早发现、早诊断的要求. SELDI(surface-enhanced laser desorption/ionization, SELDI)技术是近几年发展起来的一种蛋白质组学检测技术.具有快速、灵敏、高通量、可以对复杂的生物学样本直接检测等特点.目前采用SELDI技术筛选血清标志分子已广泛应用于多种肿瘤并筛选出了一些与肿瘤诊断、预后评判和病程检测等有重要临床价值的血清标志分子.我们实验室已经应用SELDI技术完成了对多种常见恶性肿瘤的诊断模型的建立,通过模型可以很好的对疾病进行诊断。目前制约SELDI技术应用发展重要瓶颈在于其最终结果仅为质核比,相同的质荷比可能包含多种蛋白组分,一种蛋白质可能存在于不同质荷比的蛋白峰中。发现差异蛋白后仍需要通过二维电泳,串联质谱等技术对蛋白质进行分离鉴定。而这些工作目前在技术上还不能与SELDI技术很好衔接。匹兹堡大学生物医学信息系根据近年来基于MALDI和SELDI平台的蛋白质组学研究结果建立了蛋白质组学实验数据库。基于相同芯片进行的研究存在很高的可重复性,使我们可以根据质核比检索可能的蛋白质,成为SELDI技术的有益补充,为血清标志物的研究提供了新的研究思路和方法。本研究的目的在于在将seldi技术与蛋白质组实验数据库结合,着重于探讨单个蛋白质作为结直肠癌血清标志物的可能及诊断意义。方法 采用美国Ciphergen公司的IMAC30芯片和表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪,检测169例结直肠癌和83例正常人的血清蛋白质谱。将获得的蛋白质谱采用Ciphergen公司的Biomarker Wizard和Biomarker Pattern软件分析。寻找差异蛋白峰,根据其质荷比(m/z),应用匹兹堡大学的SELDI数据库检索,检索界面网址http://www.dbmi.pitt.edu/EPO-KB/Query.jsp检索条件为SELDI平台,IMAC30芯片,血清标本,误差范围m/z 0.5%。根据检索结果得到候选蛋白质。对实验血清样本通过免疫学方法验证候选蛋白质。 结果 对169例结直肠癌患者和83例正常人血清蛋白进行分析,在质荷比2000～20000Da范围内有34个质荷比位点处的波峰强度有统计学意义(P<0.01),通过Biomarker Pattern软件进行分析,质核比为7778Da蛋白峰强度在结直肠癌病人血清中明显高于正常人,单用该质和比蛋白峰强度进行诊断,则其对结直肠癌诊断灵敏度为69.2%,特异度为77.1%。数据库检索结果提示该质和比蛋白为血小板因子4(PF4)。采用了ELISA方法对上述部分血清样本中PF4表达水平进行了测定,仍表现为结直肠癌组中高表达,对结直肠癌的诊断灵敏度为61.1%,特异度为76.9%。与SELDI质谱分析结果相似。 结论 PF4在结直肠癌患者中明显升高,其可能成为结直肠癌诊断的一个标志分子. SELDI-TOF-MS联合蛋白质组学实验数据库的方法可能为基于SELDI技术的蛋白芯片研究提供新的研究思路。

结直肠癌细胞系中肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定

这是一篇关于结直肠癌,细胞系,肿瘤干细胞,LOVO细胞系,鉴定培养,CD44/EPCAM的论文, 主要内容为第一部分结直肠癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群初步研究 目的:检测不同结直肠癌细胞系中存在肿瘤干细胞样亚群,探讨初步富集肿瘤干细胞相关亚群的方法。 方法:采用流式细胞术检测结直肠癌细胞系LOVO、SW480、HCT116中的SP(Side Population)细胞,添加生长因子的无血清培养基(SFM)培养SW480初步分离,富集肿瘤干细胞样亚群,有限稀释实验,诱导分化,传代更新,含血清/无血清培养基交替培养证实肿瘤干细胞相关亚群的存在。 结果:LOVO、SW480、HCT116细胞系中含SP细胞分别为1.0%,1.2%和1.3%;SW480细胞中约含有0.54%0.62%的细胞能够在无血清培养基中能够存活、增殖,形成悬浮的肿瘤细胞球;在SFM中加入血清可促使肿瘤干细胞相关细胞分化;肿瘤干细胞相关细胞可以连续传代,并可交替培养于含10%小牛血清培养基(SSM)和SFM中。 结论:结直肠癌细胞系LOVO、SW480、HCT116中含SP细胞,SW480中的肿瘤干细胞相关亚群可通过无血清培养基初步富集。 第二部分LOVO细胞系中结肠癌肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定 目的:从LOVO细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAMhigh特异表型的结肠癌肿瘤干细胞,观察其生物学行为,证实细胞系中肿瘤干细胞的存在。 方法:从普通血清培养的LOVO细胞系中,以流式细胞仪检测,分离具有CD44+/EPCAMhigh表型的结肠癌肿瘤干细胞,并接种于添加生长因子的无血清培养基中,观察其生长增殖过程,继而诱导分化;MTT法,流式细胞技术分别检测细胞克隆增殖能力,凋亡及细胞周期分布;最后接种裸鼠,比较细胞的成瘤率,并用免疫荧光技术观察次代肿瘤CD44/EPCAM的表达。 结果:LOVO细胞系中有17.4%的CD44+/EPCAMhigh表型细胞,并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长,连续传代,在血清的诱导下分化呈贴壁生长与未分选LOVO细胞无差别;CD44+/EPCAMhigh细胞组(PG)较EPCAMlow细胞组(NG)及未分选细胞组(CG)更强的增殖能力,细胞周期多集中在G0/G1期;以500个CD44+/EPCAMhigh细胞接种裸鼠成瘤率为90%(9/10),而104个EPCAMlow细胞成瘤率为0(0/10);次代肿瘤细胞在荧光显微镜下观察仍有少量细胞表达CD44/EPCAM。 结论:LOVO细胞株中存在CD44+/EPCAMhigh表型的结肠癌肿瘤干细胞,在无血清培养基中能稳定传代,可诱导分化,为肿瘤干细胞的研究提供了可靠细胞来源。

基于早筛助手管理平台的结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式的构建及应用研究

这是一篇关于结直肠癌,肿瘤筛查,一级亲属,配偶,微信小程序的论文, 主要内容为目的:1.通过横断面研究调查结直肠癌患者配偶及一级亲属的肠癌筛查依从性,并分析其影响因素,为构建结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式提供现实依据。2.设计和研发基于微信小程序的“早筛助手”管理平台,解决结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式中的技术及产品配置问题,同时提升医务人员的工作效率,改善结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛依从性。3.构建、应用结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式,为制定预防结直肠癌相关策略、提高肠癌的早期筛查依从性提供借鉴。方法:本研究共分为三部分:1.结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查依从性及影响因素分析采用便利抽样法,于2020年2月～5月选取重庆医科大学附属第一医院胃肠外科病房的340名结直肠癌患者的277名一级亲属和224名配偶为调查对象。由其配偶及一级亲属填写一般资料调查表、结直肠癌筛查高危因素量化问卷和中文版结直肠癌健康信念量表、结直肠癌知识、态度和行为调查问卷。最后,运用Student t检验,χ2检验和二元Logistic回归进行统计学分析。2.基于微信小程序的“早筛助手”管理平台的设计与研发结合目前结直肠癌常见的筛查方式及移动健康的流行趋势,基于微信标记语言(PHP)开发前端微信小程序,和Spring Boot框架开发后端云服务器,前后端数据遵循Java Script对象表示法(JSON)格式传输,完成系统的设计与开发。3.基于“早筛助手”管理平台的结直肠癌筛查模式的构建及应用研究本部分为类实验临床研究,将2021年2月-8月期间就诊于重庆某三甲医院胃肠外科的结直肠癌患者配偶及一级亲属纳入分析。在其陪护患者住院期间,研究者向配偶及一级亲属宣传结直肠癌筛查必要性,邀请其通过“早筛助手”参与结直肠癌筛查,通过初筛和复筛的方式,简化结直肠癌筛查流程,并于邀请1年后通过电话随访其行肠镜筛查的依从性。最后,采用χ2检验及Fisher精确检验对资料进行统计学分析,以评价该筛查模式的有效性。结果:1.共有340名结直肠癌患者的277名一级亲属及224名配偶接受问卷调查并纳入本次研究。参与结直肠癌筛查一级亲属有48人(17.3%),其中年龄≥40岁(p=0.023),经常参与体检(p=0.004),有慢性肠病史(p<0.001),愿意免费参与筛查(p=0.019),有结直肠癌多发家族史(p=0.005),结直肠癌筛查益处更高(p=0.021)以及对结直肠癌认知水平较高(p=0.005)是独立性影响因素,他们更愿意参与结直肠癌筛查。有超过一半的一级亲属对结直肠癌的认知处于中低水平(50.9%)。参与结直肠癌筛查的配偶人数为38人(17.0%),其中经常体检(p=0.017),有商业保险(p=0.022),有慢性肠病史(p=0.005),愿意参与免费筛查(p=0.024)及对肿瘤认知水平较高(p=0.017)是独立性影响因素,他们更愿意参与结直肠癌筛查。2.“早筛助手”系统开发过程简单安全有效,用户使用流程方便、接受度高、适用范围广,能够满足绝大多数人的健康需求,能有效地节约医疗资源,可以在临床工作中进行广泛应用。3.我们构建了基于“早筛助手”的结直肠癌筛查模式并在临床工作中进行初步应用。共有263名结直肠癌患者的225名一级亲属及158名配偶参与研究。排除中途退出及失访者,共有218名一级亲属及149名配偶领取FOBT试纸并纳入分析。其中FOBT试纸合格人数分别为207例(95.0%)和140例(94.0%),阳性人数分别为71例(32.6%)和43例(28.9%),1年内肠镜筛查人数分别为76名(34.5%)和46名(30.1%),病变检出人数分别为34例(44.7%)和18例(39.1%),结直肠癌配偶及一级亲属的肠癌筛查依从性明显提升。结论:1.结直肠癌患者配偶及一级亲属参与肠癌筛查依从性普遍较低,且影响因素涉及多个层面,应制订相应干预措施以加强对结直肠癌患者配偶及一级亲属参与肠癌筛查的管理,提高肠癌筛查依从性。2.“早筛助手”管理平台具备创新性、适宜性和科学性,简化了结直肠癌筛查流程,为满足结直肠癌早期筛查模式构建和应用的技术需要提供了支持。3.本研究开创的基于“早筛助手”管理平台的结直肠癌筛查模式能显著提升结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查依从性及病变检出率,基于外科病房的结直肠癌筛查策略能显著提升高风险人群的肿瘤筛查依从性。并为结直肠癌筛查管理提供了新途径,在未来的临床工作中可以进行广泛推广。

结直肠癌表观遗传学标志物数据库的构建及生物信息学分析

这是一篇关于结直肠癌,表观遗传学,生物标志物,系统生物学的论文, 主要内容为结直肠癌是发生在结肠或者直肠内壁的恶性肿瘤,在癌症中全世界致死数排名第二。因此,找出敏感性、特异性较好的生物标志物对于提高结直肠癌的诊断精度、监测结直肠癌患者预后和治疗效果具有重要意义。本课题主要分为两部分:第一部分,我们通过人工方式收集数据,构建了结直肠癌表观遗传学生物标志物数据库CRC-EBD(www.sysbio.org.cn/EBD)。该数据库采用B/S架构,用户可以通过浏览器直接访问。目前,数据库中合计收录了 334条结直肠癌表观遗传学生物标志物数据。第二部分,我们整合结直肠癌甲基化芯片数据、人类蛋白质相互作用关系以及CRC-EBD中的数据,重点分析结直肠癌DNA甲基化诊断标志物的网络拓扑学特征和生物功能特征,并据此筛选出了 23个潜在甲基化生物标志物,其中的大部分CpG有较高的AUC值,10个基因已经报道与结直肠癌相关或者可以作为候选标志物。此外,我们通过对这些潜在标志物基因进行功能富集分析,从系统生物学角度研究了这些标志物参与的结直肠癌发生和发展机理。我们的数据库为相关医疗工作者和科研人员提供了查询结直肠癌表观遗传学生物标志物的交互式平台,为后续研究提供了便利。同时,我们通过网络拓扑学分析寻找新的潜在DNA甲基化生物标志物,为结直肠癌发病机理和诊断治疗提供了方向和思路。

NET-1在结直肠癌中的表达及临床意义

这是一篇关于结直肠癌,NET-1,RT-PCR,Western--blot,免疫组化,生存分析的论文, 主要内容为目的:探讨NET-1(C4.8 identifica"tion of novel molecular markers which correlate with HPV-induced tumor progression、P503s、Tspan-1)在结直肠癌中的表达水平与其病理特征的相关性,并通过病例的短期随访,进一步证实NET-1是否可作为结直肠癌早期诊断、预后监测的重要分子生物学指标。方法:以RT-PCR方法和免疫组织化学方法(IHC)检测结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中NET-1的mRNA和蛋白的表达,并利用SPSS19.0软件统计分析入组患者NET-1表达水平与相对应临床病理参数之间的关系。RT-PCR方法从人类结肠正常上皮细胞(NCM460)提取的RNA逆转录获得的cDNA中扩增NET-1的编码区片段,连入19T-simple Vector克隆载体,经过酶切测序验证后插入pIRES2-EGFP真核表达载体中,再次酶切测序验证,得到NET-1的真核表达载体,用于转染HCT116及HT29结直肠癌细胞,并通过抗生素嘌呤霉素筛选建立稳定表达NET-1细胞株及其阴性对照组。以细胞增殖实验、细胞迁移实验,检测NET-1过表达后HCT116及HT29结直肠癌细胞增殖、迁移能力的改变。Western-blot检测HCT116细胞过表达NET-1后金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白水平变化。利用shRNA干扰技术下调HCT116及HT29结直肠癌细胞中的NET-1表达,并检测下调NET-1后HCT116及HT29结直肠癌细胞增殖、迁移能力的改变。Western-blot检测HCT116细胞敲低NET-1后MMP-9蛋白水平变化。将入组结直肠癌患者分为NET-1阳性表达组及阴性表达组,并进行随访,收集数据通过SPSS19.0进行生存回归分析。结果:免疫组织化学染色:结直肠癌患者组织中NET-1表达阳性率高于正常人群组织;Ki-67、MMP-9、VEGF三者的阳性表达与NET-1表达阳性具有一致性;NET-1表达阳性率与肿瘤分化程度的相关性无统计学意义。RT-PCR:NET-1mRNA相对表达量在正常人肠粘膜上皮组织中低于结直肠癌组织;癌旁组织表达量低于癌组织。Western-blot:正常人群中NET-1蛋白表达量低于结直肠癌患者,组织中的蛋白的表达量在不同程度的肿瘤病理组织中表达量不一致,且随着病理程度的恶化呈上升趋势。细胞增殖活力检测:与对照组细胞相比,过表达NET-1的HCT116细胞(HCT116-NET1)增殖能力明显增强(P<0.01)。MTT细胞增殖实验显示,HCT116-NET1细胞24小时及48小时吸光度显著高于对照组(P<0.01)。此研究结果表明,NET-1能增强结直肠癌细胞的体外增殖能力。细胞侵袭能力检测:与对照组细胞相比,过表达NET1的HCT116细胞(HCT116-NET1)侵袭转移能力明显增强(P<0.01)。过表达NET1的HCT116细胞侵袭数目为30.0±3.0,而对照组细胞的平均细胞侵袭数目为16.0±5.0。此研究结果表明,NET-1能抑制结直肠癌HCT116细胞的体外侵袭转移能力。生存分析:经过随访后得到生存分析结果,在NET-1表达呈阳性组的生存时间与阴性组之间存在有差异(P<0.05),并且在不同的病理类型中的生存时间也不一致(P<0.05)。结论:1.NET-l的表达在结直肠癌的发生、发展过程中发挥重要作用;2.NET-l在结直肠癌中的表达与TNM分期、淋巴结转移、病变的分化程度密切相关,且与Ki-67、MMP-9、VEGF亦具有明显相关性;3.结直肠癌中NET-l的表达与患者的生存期相关,高表达NET-l患者预后较差。

SELDI-TOF-MS联合蛋白质组学实验数据库对结直肠癌血清标志物的研究

这是一篇关于结直肠癌,血小板因子,生物学标记,表面增强基质辅助激光解析飞行时间质谱,蛋白质组学实验数据库的论文, 主要内容为研究背景与目的 目前,结直肠癌已上升为我国肿瘤发病率的第三位,约有1/ 3的患者治疗时已属晚期。现有的临床指标由于敏感性和特异性低,往往达不到早发现、早诊断的要求. SELDI(surface-enhanced laser desorption/ionization, SELDI)技术是近几年发展起来的一种蛋白质组学检测技术.具有快速、灵敏、高通量、可以对复杂的生物学样本直接检测等特点.目前采用SELDI技术筛选血清标志分子已广泛应用于多种肿瘤并筛选出了一些与肿瘤诊断、预后评判和病程检测等有重要临床价值的血清标志分子.我们实验室已经应用SELDI技术完成了对多种常见恶性肿瘤的诊断模型的建立,通过模型可以很好的对疾病进行诊断。目前制约SELDI技术应用发展重要瓶颈在于其最终结果仅为质核比,相同的质荷比可能包含多种蛋白组分,一种蛋白质可能存在于不同质荷比的蛋白峰中。发现差异蛋白后仍需要通过二维电泳,串联质谱等技术对蛋白质进行分离鉴定。而这些工作目前在技术上还不能与SELDI技术很好衔接。匹兹堡大学生物医学信息系根据近年来基于MALDI和SELDI平台的蛋白质组学研究结果建立了蛋白质组学实验数据库。基于相同芯片进行的研究存在很高的可重复性,使我们可以根据质核比检索可能的蛋白质,成为SELDI技术的有益补充,为血清标志物的研究提供了新的研究思路和方法。本研究的目的在于在将seldi技术与蛋白质组实验数据库结合,着重于探讨单个蛋白质作为结直肠癌血清标志物的可能及诊断意义。方法 采用美国Ciphergen公司的IMAC30芯片和表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪,检测169例结直肠癌和83例正常人的血清蛋白质谱。将获得的蛋白质谱采用Ciphergen公司的Biomarker Wizard和Biomarker Pattern软件分析。寻找差异蛋白峰,根据其质荷比(m/z),应用匹兹堡大学的SELDI数据库检索,检索界面网址http://www.dbmi.pitt.edu/EPO-KB/Query.jsp检索条件为SELDI平台,IMAC30芯片,血清标本,误差范围m/z 0.5%。根据检索结果得到候选蛋白质。对实验血清样本通过免疫学方法验证候选蛋白质。 结果 对169例结直肠癌患者和83例正常人血清蛋白进行分析,在质荷比2000～20000Da范围内有34个质荷比位点处的波峰强度有统计学意义(P<0.01),通过Biomarker Pattern软件进行分析,质核比为7778Da蛋白峰强度在结直肠癌病人血清中明显高于正常人,单用该质和比蛋白峰强度进行诊断,则其对结直肠癌诊断灵敏度为69.2%,特异度为77.1%。数据库检索结果提示该质和比蛋白为血小板因子4(PF4)。采用了ELISA方法对上述部分血清样本中PF4表达水平进行了测定,仍表现为结直肠癌组中高表达,对结直肠癌的诊断灵敏度为61.1%,特异度为76.9%。与SELDI质谱分析结果相似。 结论 PF4在结直肠癌患者中明显升高,其可能成为结直肠癌诊断的一个标志分子. SELDI-TOF-MS联合蛋白质组学实验数据库的方法可能为基于SELDI技术的蛋白芯片研究提供新的研究思路。

结直肠癌细胞系中肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定

这是一篇关于结直肠癌,细胞系,肿瘤干细胞,LOVO细胞系,鉴定培养,CD44/EPCAM的论文, 主要内容为第一部分结直肠癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群初步研究 目的:检测不同结直肠癌细胞系中存在肿瘤干细胞样亚群,探讨初步富集肿瘤干细胞相关亚群的方法。 方法:采用流式细胞术检测结直肠癌细胞系LOVO、SW480、HCT116中的SP(Side Population)细胞,添加生长因子的无血清培养基(SFM)培养SW480初步分离,富集肿瘤干细胞样亚群,有限稀释实验,诱导分化,传代更新,含血清/无血清培养基交替培养证实肿瘤干细胞相关亚群的存在。 结果:LOVO、SW480、HCT116细胞系中含SP细胞分别为1.0%,1.2%和1.3%;SW480细胞中约含有0.54%0.62%的细胞能够在无血清培养基中能够存活、增殖,形成悬浮的肿瘤细胞球;在SFM中加入血清可促使肿瘤干细胞相关细胞分化;肿瘤干细胞相关细胞可以连续传代,并可交替培养于含10%小牛血清培养基(SSM)和SFM中。 结论:结直肠癌细胞系LOVO、SW480、HCT116中含SP细胞,SW480中的肿瘤干细胞相关亚群可通过无血清培养基初步富集。 第二部分LOVO细胞系中结肠癌肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定 目的:从LOVO细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAMhigh特异表型的结肠癌肿瘤干细胞,观察其生物学行为,证实细胞系中肿瘤干细胞的存在。 方法:从普通血清培养的LOVO细胞系中,以流式细胞仪检测,分离具有CD44+/EPCAMhigh表型的结肠癌肿瘤干细胞,并接种于添加生长因子的无血清培养基中,观察其生长增殖过程,继而诱导分化;MTT法,流式细胞技术分别检测细胞克隆增殖能力,凋亡及细胞周期分布;最后接种裸鼠,比较细胞的成瘤率,并用免疫荧光技术观察次代肿瘤CD44/EPCAM的表达。 结果:LOVO细胞系中有17.4%的CD44+/EPCAMhigh表型细胞,并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长,连续传代,在血清的诱导下分化呈贴壁生长与未分选LOVO细胞无差别;CD44+/EPCAMhigh细胞组(PG)较EPCAMlow细胞组(NG)及未分选细胞组(CG)更强的增殖能力,细胞周期多集中在G0/G1期;以500个CD44+/EPCAMhigh细胞接种裸鼠成瘤率为90%(9/10),而104个EPCAMlow细胞成瘤率为0(0/10);次代肿瘤细胞在荧光显微镜下观察仍有少量细胞表达CD44/EPCAM。 结论:LOVO细胞株中存在CD44+/EPCAMhigh表型的结肠癌肿瘤干细胞,在无血清培养基中能稳定传代,可诱导分化,为肿瘤干细胞的研究提供了可靠细胞来源。

基于早筛助手管理平台的结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式的构建及应用研究

这是一篇关于结直肠癌,肿瘤筛查,一级亲属,配偶,微信小程序的论文, 主要内容为目的:1.通过横断面研究调查结直肠癌患者配偶及一级亲属的肠癌筛查依从性,并分析其影响因素,为构建结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式提供现实依据。2.设计和研发基于微信小程序的“早筛助手”管理平台,解决结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式中的技术及产品配置问题,同时提升医务人员的工作效率,改善结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛依从性。3.构建、应用结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查模式,为制定预防结直肠癌相关策略、提高肠癌的早期筛查依从性提供借鉴。方法:本研究共分为三部分:1.结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查依从性及影响因素分析采用便利抽样法,于2020年2月～5月选取重庆医科大学附属第一医院胃肠外科病房的340名结直肠癌患者的277名一级亲属和224名配偶为调查对象。由其配偶及一级亲属填写一般资料调查表、结直肠癌筛查高危因素量化问卷和中文版结直肠癌健康信念量表、结直肠癌知识、态度和行为调查问卷。最后,运用Student t检验,χ2检验和二元Logistic回归进行统计学分析。2.基于微信小程序的“早筛助手”管理平台的设计与研发结合目前结直肠癌常见的筛查方式及移动健康的流行趋势,基于微信标记语言(PHP)开发前端微信小程序,和Spring Boot框架开发后端云服务器,前后端数据遵循Java Script对象表示法(JSON)格式传输,完成系统的设计与开发。3.基于“早筛助手”管理平台的结直肠癌筛查模式的构建及应用研究本部分为类实验临床研究,将2021年2月-8月期间就诊于重庆某三甲医院胃肠外科的结直肠癌患者配偶及一级亲属纳入分析。在其陪护患者住院期间,研究者向配偶及一级亲属宣传结直肠癌筛查必要性,邀请其通过“早筛助手”参与结直肠癌筛查,通过初筛和复筛的方式,简化结直肠癌筛查流程,并于邀请1年后通过电话随访其行肠镜筛查的依从性。最后,采用χ2检验及Fisher精确检验对资料进行统计学分析,以评价该筛查模式的有效性。结果:1.共有340名结直肠癌患者的277名一级亲属及224名配偶接受问卷调查并纳入本次研究。参与结直肠癌筛查一级亲属有48人(17.3%),其中年龄≥40岁(p=0.023),经常参与体检(p=0.004),有慢性肠病史(p<0.001),愿意免费参与筛查(p=0.019),有结直肠癌多发家族史(p=0.005),结直肠癌筛查益处更高(p=0.021)以及对结直肠癌认知水平较高(p=0.005)是独立性影响因素,他们更愿意参与结直肠癌筛查。有超过一半的一级亲属对结直肠癌的认知处于中低水平(50.9%)。参与结直肠癌筛查的配偶人数为38人(17.0%),其中经常体检(p=0.017),有商业保险(p=0.022),有慢性肠病史(p=0.005),愿意参与免费筛查(p=0.024)及对肿瘤认知水平较高(p=0.017)是独立性影响因素,他们更愿意参与结直肠癌筛查。2.“早筛助手”系统开发过程简单安全有效,用户使用流程方便、接受度高、适用范围广,能够满足绝大多数人的健康需求,能有效地节约医疗资源,可以在临床工作中进行广泛应用。3.我们构建了基于“早筛助手”的结直肠癌筛查模式并在临床工作中进行初步应用。共有263名结直肠癌患者的225名一级亲属及158名配偶参与研究。排除中途退出及失访者,共有218名一级亲属及149名配偶领取FOBT试纸并纳入分析。其中FOBT试纸合格人数分别为207例(95.0%)和140例(94.0%),阳性人数分别为71例(32.6%)和43例(28.9%),1年内肠镜筛查人数分别为76名(34.5%)和46名(30.1%),病变检出人数分别为34例(44.7%)和18例(39.1%),结直肠癌配偶及一级亲属的肠癌筛查依从性明显提升。结论:1.结直肠癌患者配偶及一级亲属参与肠癌筛查依从性普遍较低,且影响因素涉及多个层面,应制订相应干预措施以加强对结直肠癌患者配偶及一级亲属参与肠癌筛查的管理,提高肠癌筛查依从性。2.“早筛助手”管理平台具备创新性、适宜性和科学性,简化了结直肠癌筛查流程,为满足结直肠癌早期筛查模式构建和应用的技术需要提供了支持。3.本研究开创的基于“早筛助手”管理平台的结直肠癌筛查模式能显著提升结直肠癌患者配偶及一级亲属肠癌筛查依从性及病变检出率,基于外科病房的结直肠癌筛查策略能显著提升高风险人群的肿瘤筛查依从性。并为结直肠癌筛查管理提供了新途径,在未来的临床工作中可以进行广泛推广。