5个研究背景和意义示例,教你写计算机宫颈癌论文

今天分享的是关于宫颈癌的5篇计算机毕业论文范文, 如果你的论文涉及到宫颈癌等主题,本文能够帮助到你 基于深度神经网络的宫颈癌智能辅助诊断方法研究 这是一篇关于深度学习

今天分享的是关于宫颈癌的5篇计算机毕业论文范文, 如果你的论文涉及到宫颈癌等主题,本文能够帮助到你

基于深度神经网络的宫颈癌智能辅助诊断方法研究

这是一篇关于深度学习,卷积神经网络,多分类,分割,宫颈癌,阴道镜图像的论文, 主要内容为宫颈癌是一种原发于子宫颈的恶性肿瘤。其早期治愈率极高,所以通过早期筛查确定子宫颈上皮内瘤变和宫颈癌对于及时预防和治疗宫颈癌具有重要意义。阴道镜检查是临床上筛查宫颈癌最常用的方法之一,用于指导宫颈癌筛查前的活检,但其准确率、敏感度和特异度受临床医生的经验水平影响,不同的阴道镜医师之间病变的检出率存在显著差异,易导致漏诊、误诊等问题。同时,目前我国的患者数量与有经验的阴道镜医生数量不匹配,导致部分患者无法及时就诊。基于深度学习的图像分类和分割技术在计算机辅助诊断上表现良好,能够有效缓解当前宫颈癌筛查的压力。本文针对阴道镜下宫颈病变特征不明显、多尺度和不规则的识别难点,研究并实现了分类和分割两种模型在宫颈病变检测中的应用,具体研究内容包括:(1)针对性地构建了两个类型的宫颈病变数据集:多分类数据集和分割数据集。在多分类数据集的构建中,将图像分为LSIL、HSIL、宫颈癌、宫颈赘生物和正常五个类别,按照训练集:验证集:测试集=9:1:1的比例将图像分为三部分。在分割数据集的构建中,以病理结果作为金标准用Labelme软件对阴道镜图像中的病变部位进行标注,按照训练集:测试集:验证集=4:1:1的比例将图像分为三部分。两种数据集都进行了图像增广处理,可有效提升训练模型的泛化能力。(2)提出了一种基于改进ShuffleNet-V2的轻量化宫颈病变多分类模型。分别加入了通道注意力机制SKNet和SENet,让网络提高对病变区域的关注,抑制不重要的背景信息。实验结果显示,两种改进的网络比原网络的分类准确率分别提升了0.86%和1.01%,加入SENet对网络性能的提升更为显著。此外,通过对比改进网络和其它网络的分类准确率及模型尺寸,证明改进后的网络综合性能达到最优。(3)提出了一种基于改进U-Net的宫颈病变区域分割模型。与基础网络U-Net相比,改进后的网络加入了特征金字塔结构,提取了多尺度信息,可以更好地识别点状血管等细小特征,并且针对宫颈病变区域大小形状不规则的问题,加入了动态感受野模块,提升了模型捕捉边界信息的能力。实验结果显示,改进后的模型的分割准确率比原网络提高了3.4%,证明了对模型的改进可有效提高宫颈病变区域分割的性能,实现了分割病变区域的任务。

MicroRNA-221在宫颈癌侵袭和转移中的分子调控机制研究

这是一篇关于Twist2,miR-221,ARID1A,宫颈癌,侵袭转移的论文, 主要内容为研究背景和目的 宫颈癌是妇女生殖系统中最常见的恶性肿瘤。近年国外报道在普通人群中宫颈癌的发病率有所下降,但在发展中国家尤其在我国,由于HPV感染增多、筛查程序的混乱等,宫颈癌的发病率和死亡率反而增加并有年轻化倾向。虽然筛查和手术联合综合治疗的防治模式已有效改善早期宫颈癌的预后,但转移、复发的宫颈癌却很难达到彻底根治,也是患者死亡的主要危险因素。因而,加强宫颈癌侵袭进展机制的基础研究,阐明宫颈癌转移的分子机制,对宫颈癌转移进行早期预测、诊断和预后评估及对于提高宫颈癌治愈率,降低死亡率具有重要科学意义,文献报道人类癌症中存在miRNAs的异常表达,50%以上的人类miRNAs位于肿瘤相关基因区域,例如脆性位点、杂合子丢失区或靠近癌基因、抑癌基因的部位,易于发生缺失、扩增或转位等。因此,,miRNAs可能通过靶向调控特定的癌基因或抑癌基因而在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。同时,miRNAs还受上游转录因子的调控,这样从上到下构成复杂的调控网络进一步调节肿瘤的发生发展,miRNAs与宫颈癌关系的报道近年来逐渐增多,在宫颈癌侵袭转移的过程中具有重要作用。 本文利用miRNA芯片在稳定细胞株中(siha-twist2及siha-shtwist2)筛选出与宫颈癌侵袭转移因子twist2密切相关的niRNA221,明确其在宫颈癌侵袭转移中的作用机制。本文的研究目的如下: 1.宫颈癌侵袭转移相关miRNA的筛选及验证; 2.miR221通过靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌侵袭转移中的作用; 3.miR221与上游转录因子twist2之间作用的鉴定。 研究方法 1.宫颈癌侵袭转移相关niRNA的筛选及功能验证 1.1利用稳筛细胞株(siha-twist2及siha-shtwist2)及miRNA芯片筛选与宫颈癌侵袭转移因子twist2相关的miRNA并通过荧光定量PCR法(qPCR)验证芯片结果。 1.2利用qPCR、westernblot、划痕实验及Borden侵袭小室实验对miRNA221在宫颈癌细胞侵袭转移行为中的作用进行验证。 2. miR221通过靶基因ARID1A及wnt/p-catenin信号通路在宫颈癌侵袭转移中的作用 2.1选取10个常用的miRNA靶基因预测软件DIANAmT、miRanda、miRDB、 miRWalk、RNAhybrid、PICTAR4、PICTAR5、PITA、RNA22、Targetscan对miRNA221的下游靶基因进行预测;利用NIAID/NIH提供的DAVID6.7分析平台并结合Biocarta pathway和KEGG pathway软件对miR-221的下游靶基因进行了功能聚类及信号通路分析。 2.2利用westernblot、载体构建及双荧光素酶报告分析实验对miRNA221下游靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路的调控进行验证。 3.miR221与上游转录因子twist2之间作用的鉴定 3.1利用qPCR、westernblot、划痕实验及Borden侵袭小室实验对上游转录因子twist2调控niRNA221诱导宫颈癌细胞侵袭转移行为进行探讨。 3.2利用载体构建及双荧光素酶报告分析实验对miRNA221与上游转录因子twist2之间直接作用进行验证。 研究结果 1.宫颈癌侵袭转移相关miRNA的筛选及功能验证 1.1宫颈癌侵袭转移相关miRNA的筛选 利用配对细胞株siha、siha-tw2、siha-shtw2送检芯片,结果提示8个差异性表达最明显的1nicroRNA,其中包括miRNA221;利用实时荧光定量PCR(qPCR)在配对细胞株中检测差异表达明显的microRNA,对芯片结果进行验证,2-△△CT值通过单因素方差分析结果显示:miRNA221差异性表达明显(F=64.64,P<0.001),进一步在宫颈癌组织中检测miRNA221的表达,发现宫颈癌组织中miRNA221的表达与twist2的表达呈正相关,与芯片结果相符(F0.70,F=24.75,P<0.001)。 1.2miR221对宫颈癌细胞侵袭转移行为的影响 (1)利用qPCR检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、siha-m、siha-i中miR221及EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,以siha组为对照,经单因素方差分析检测,结果显示五组间E-CAD、N-CAD、Vimentin的表达具有显著差异(F=34.1,P<0.001;F=27.026,P<0.001;F=17,P<0.001);对5组间进行两两比较,结果显示,miR-221在siha-m中的表达明显高于siha及siha-nc(m)组,且EMT相关标记物E-CAD表达明显降低,而N-CAD及Vimentin表达明显上升;miR-221在siha-i中的表达明显低于siha及siha-nc(i)组,EMT相关标记物E-CAD表达明显升高,而N-CAD及Vimentin表达明显下降。 (2)利用westemblot检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、siha-m、 siha-i中EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,结果显示,在宫颈癌siha细胞中,E-CAD在过表达niR221组siha-m中的表达明显低于siha及siha-nc(m),而N-CAD及Vimentin的表达明显增高;相反,E-CAD在沉默miR-221组siha-i的表达明显增高,而N-CAD及Vimentin的表达明显降低。 (3)利用划痕实验检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、siha-m、 siha-i不同组中宫颈癌细胞的迁移能力,结果显示,siha-m组的细胞迁移能力明显高于siha、siha-nc(m)组,而siha-i组的细胞迁移能力明显低于siha、siha-nc(i)。 (4)利用Borden侵袭小室检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、 siha-m、siha-i不同组之间细胞的体外侵袭能力变化,统计结果显示,5组之间细胞的侵袭能力具有显著性差异。且siha-m组细胞穿膜数目比siha、siha-nc(m)显著增多,而siha-i组细胞穿膜数目比siha、siha-nc(i)显著减少。 2.miR221通过靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌侵袭转移中的作用 2.1miR221下游靶基因及信号通路的预测 (1)miR221下游靶基因的生物信息学预测 选取10个常用的niRNA靶基因预测软件DIANAmT、miRanda、miRDB、 miRWalk、RNAhybrid、PICTAR4、PICTAR5、PITA、RNA22、Targetscan对miR-221的靶基因进行预测,ARID1A基因的预测值最高,于是我们选择ARID1A作为miR-221的靶基因。并对靶基因ARID1A进行实验鉴定。 (2)MiR221下游信号通路的生物信息学预测 利用NIAID/NIH提供的DAVID6.7分析平台并结合Biocarta pathway和KEGG pathway软件对miR-221的下游靶基因进行了功能聚类及信号通路分析,结果显示wnt/β-catenin信号通路的预测频率最高。 2.2miR221对下游靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路的调控 (1)利用westernblot检测宫颈癌细胞株siha不同处理组siha、siha-nc(m)、 siha-nc(i)、siha-m、siha-i中ARID1A及磷酸化β-catenin的表达情况,结果显示,siha-m组中ARID1A的表达明显低于siha及siha-nc(m)组;而siha-i组中ARID1A的表达明显高于siha及siha-nc(i)组;siha-m组中磷酸化β-catenin的表达明显低于siha及siha-nc(m)组,而siha-i组与siha、siha-nc(i)组之间磷酸化P-catenin的表达无明显差异。 (2)在宫颈癌细胞株siha中,转染构建质粒pscicheck2/ARID1A及miR221mimic,对siha(blank)、miR221NC-lu、miR221mi-luc三组利用双荧光素酶报告分析方法检测各组细胞中荧光素酶活性,结果显示,同时转染了pscicheck2/ARID1A及miR221mimic的miR221mi-luc组的荧光素酶活性明显低于blan、miR221NC-luc组(=635.4,P<0.001),blank及miR221NC-luc组之间无统计学差异。 3.miR221与上游转录因子twist2之间作用的鉴定 3.1twist2对miR221促进宫颈癌侵袭转移行为的调控 (1)利用qPCR检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2i、 sihashtw2-m中EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,以siha组为对照,经单因素方差分析检测,结果显示五组间E-CAD、N-CAD、Vimentin的表达具有显著差异(F=221.991,P<0.001;F=369.073,P<0.001;F=404.261,P<0.001);对5组间进行两两比较,结果显示,E-CAD在sihatw2-i(转染了miR221inhibitor)中的表达明显高于sihatw2组,而N-CAD及Vimentin表达明显下降;E-CAD在sihashtw2-m(转染了miR221mimic)中的表达明显低于sihashtw2组,而N-CAD及Vimentin表达明显上升。 (2)利用westernblot检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2-i、 sihashtw2-m中EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,结果提示:E-CAD在过表达miR221组sihashtw2-m中的表达明显低于sihashtw2,而N-CAD及Vimentin的表达明显增高;相反,E-CAD在沉默miR-221组sihatw2-i的表达较siha及sihatw2明显增高,而N-CAD及Vimentin的表达明显降低。 (3)利用划痕实验检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2-i、sihashtw2-m不同组中宫颈癌细胞的迁移能力,结果显示,sihashtw2-m组的细胞迁移能力明显高于sihashtw2组,而sihatw2-i组的细胞迁移能力明显低于sihatw2。 (4)利用Borden侵袭小室检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2-i、 sihashtw2-m不同组之间细胞的体外侵袭能力变化,统计结果显示,5组之间细胞的侵袭能力具有显著性差异。且sihashtw2-m组细胞穿膜数目比sihashtw2显著增多,而sihatw2-i组细胞穿膜数目比sihatw2显著减少。 3.2twist2与miR221直接作用的验证 (1)通过Ensembl数据库,在线获得编码miR221序列上游2kb作为miR-221的启动子序列。 (2)利用三种在线软件(Mapper2,Consite及TRED)预测及分析可能与miR-221启动子结合的转录因子,并结合前期关于宫颈癌侵袭转移的相关研究,确定twist2作为miR-221的转录因子。 (3)利用双荧光素酶报告基因检测miR221启动子和转录因子twist2之间的荧光素酶活性,结果显示,当共同转染PGL3-basic/221和pcDNA3.1/tw2时,共同转染组(tw2+PGL3-221)较单独转染PGL3-221组及blank组荧光素酶活性显著增强,表明twist2能明显促进miR-221启动子的转录活性(F=130,P<0.001)。 结论 1、成功筛选出与宫颈癌侵袭转移因子twist2相关的8个miRNA,通过在细胞株siha、siha-tw2、siha-shtw2中验证得出miR221、miR221*、miR502-3p的差异性表达与芯片结果相符,其中,miR221差异性表达最明显。 2、miR-221可能通过靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞的侵袭转移。 3、twist2正性调控miR221的表达,促进其在宫颈癌侵袭转移中的作用。 4、提出一个新的调控机制,即miR-221在twist2转录因子的正性调控下可能通过ARID1A及wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌的侵袭和转移。 本项目的创新之处 1、已发现miR221在多种肿瘤发生发展中起促进作用,而其与宫颈癌侵袭转移的关系尚未见报道。 2、提出了一个新的miR221表达调控机制,选题具有很好的原始创新性和鲜明的研究特色。 3、阐明twist2/miR221/ARID1A在宫颈癌侵袭和转移中的作用机制,将为肿瘤转移的诊治、预后及药物筛选提供新的基因和miRNA靶点。

MicroRNA-221在宫颈癌侵袭和转移中的分子调控机制研究

这是一篇关于Twist2,miR-221,ARID1A,宫颈癌,侵袭转移的论文, 主要内容为研究背景和目的 宫颈癌是妇女生殖系统中最常见的恶性肿瘤。近年国外报道在普通人群中宫颈癌的发病率有所下降,但在发展中国家尤其在我国,由于HPV感染增多、筛查程序的混乱等,宫颈癌的发病率和死亡率反而增加并有年轻化倾向。虽然筛查和手术联合综合治疗的防治模式已有效改善早期宫颈癌的预后,但转移、复发的宫颈癌却很难达到彻底根治,也是患者死亡的主要危险因素。因而,加强宫颈癌侵袭进展机制的基础研究,阐明宫颈癌转移的分子机制,对宫颈癌转移进行早期预测、诊断和预后评估及对于提高宫颈癌治愈率,降低死亡率具有重要科学意义,文献报道人类癌症中存在miRNAs的异常表达,50%以上的人类miRNAs位于肿瘤相关基因区域,例如脆性位点、杂合子丢失区或靠近癌基因、抑癌基因的部位,易于发生缺失、扩增或转位等。因此,,miRNAs可能通过靶向调控特定的癌基因或抑癌基因而在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。同时,miRNAs还受上游转录因子的调控,这样从上到下构成复杂的调控网络进一步调节肿瘤的发生发展,miRNAs与宫颈癌关系的报道近年来逐渐增多,在宫颈癌侵袭转移的过程中具有重要作用。 本文利用miRNA芯片在稳定细胞株中(siha-twist2及siha-shtwist2)筛选出与宫颈癌侵袭转移因子twist2密切相关的niRNA221,明确其在宫颈癌侵袭转移中的作用机制。本文的研究目的如下: 1.宫颈癌侵袭转移相关miRNA的筛选及验证; 2.miR221通过靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌侵袭转移中的作用; 3.miR221与上游转录因子twist2之间作用的鉴定。 研究方法 1.宫颈癌侵袭转移相关niRNA的筛选及功能验证 1.1利用稳筛细胞株(siha-twist2及siha-shtwist2)及miRNA芯片筛选与宫颈癌侵袭转移因子twist2相关的miRNA并通过荧光定量PCR法(qPCR)验证芯片结果。 1.2利用qPCR、westernblot、划痕实验及Borden侵袭小室实验对miRNA221在宫颈癌细胞侵袭转移行为中的作用进行验证。 2. miR221通过靶基因ARID1A及wnt/p-catenin信号通路在宫颈癌侵袭转移中的作用 2.1选取10个常用的miRNA靶基因预测软件DIANAmT、miRanda、miRDB、 miRWalk、RNAhybrid、PICTAR4、PICTAR5、PITA、RNA22、Targetscan对miRNA221的下游靶基因进行预测;利用NIAID/NIH提供的DAVID6.7分析平台并结合Biocarta pathway和KEGG pathway软件对miR-221的下游靶基因进行了功能聚类及信号通路分析。 2.2利用westernblot、载体构建及双荧光素酶报告分析实验对miRNA221下游靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路的调控进行验证。 3.miR221与上游转录因子twist2之间作用的鉴定 3.1利用qPCR、westernblot、划痕实验及Borden侵袭小室实验对上游转录因子twist2调控niRNA221诱导宫颈癌细胞侵袭转移行为进行探讨。 3.2利用载体构建及双荧光素酶报告分析实验对miRNA221与上游转录因子twist2之间直接作用进行验证。 研究结果 1.宫颈癌侵袭转移相关miRNA的筛选及功能验证 1.1宫颈癌侵袭转移相关miRNA的筛选 利用配对细胞株siha、siha-tw2、siha-shtw2送检芯片,结果提示8个差异性表达最明显的1nicroRNA,其中包括miRNA221;利用实时荧光定量PCR(qPCR)在配对细胞株中检测差异表达明显的microRNA,对芯片结果进行验证,2-△△CT值通过单因素方差分析结果显示:miRNA221差异性表达明显(F=64.64,P<0.001),进一步在宫颈癌组织中检测miRNA221的表达,发现宫颈癌组织中miRNA221的表达与twist2的表达呈正相关,与芯片结果相符(F0.70,F=24.75,P<0.001)。 1.2miR221对宫颈癌细胞侵袭转移行为的影响 (1)利用qPCR检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、siha-m、siha-i中miR221及EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,以siha组为对照,经单因素方差分析检测,结果显示五组间E-CAD、N-CAD、Vimentin的表达具有显著差异(F=34.1,P<0.001;F=27.026,P<0.001;F=17,P<0.001);对5组间进行两两比较,结果显示,miR-221在siha-m中的表达明显高于siha及siha-nc(m)组,且EMT相关标记物E-CAD表达明显降低,而N-CAD及Vimentin表达明显上升;miR-221在siha-i中的表达明显低于siha及siha-nc(i)组,EMT相关标记物E-CAD表达明显升高,而N-CAD及Vimentin表达明显下降。 (2)利用westemblot检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、siha-m、 siha-i中EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,结果显示,在宫颈癌siha细胞中,E-CAD在过表达niR221组siha-m中的表达明显低于siha及siha-nc(m),而N-CAD及Vimentin的表达明显增高;相反,E-CAD在沉默miR-221组siha-i的表达明显增高,而N-CAD及Vimentin的表达明显降低。 (3)利用划痕实验检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、siha-m、 siha-i不同组中宫颈癌细胞的迁移能力,结果显示,siha-m组的细胞迁移能力明显高于siha、siha-nc(m)组,而siha-i组的细胞迁移能力明显低于siha、siha-nc(i)。 (4)利用Borden侵袭小室检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、 siha-m、siha-i不同组之间细胞的体外侵袭能力变化,统计结果显示,5组之间细胞的侵袭能力具有显著性差异。且siha-m组细胞穿膜数目比siha、siha-nc(m)显著增多,而siha-i组细胞穿膜数目比siha、siha-nc(i)显著减少。 2.miR221通过靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌侵袭转移中的作用 2.1miR221下游靶基因及信号通路的预测 (1)miR221下游靶基因的生物信息学预测 选取10个常用的niRNA靶基因预测软件DIANAmT、miRanda、miRDB、 miRWalk、RNAhybrid、PICTAR4、PICTAR5、PITA、RNA22、Targetscan对miR-221的靶基因进行预测,ARID1A基因的预测值最高,于是我们选择ARID1A作为miR-221的靶基因。并对靶基因ARID1A进行实验鉴定。 (2)MiR221下游信号通路的生物信息学预测 利用NIAID/NIH提供的DAVID6.7分析平台并结合Biocarta pathway和KEGG pathway软件对miR-221的下游靶基因进行了功能聚类及信号通路分析,结果显示wnt/β-catenin信号通路的预测频率最高。 2.2miR221对下游靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路的调控 (1)利用westernblot检测宫颈癌细胞株siha不同处理组siha、siha-nc(m)、 siha-nc(i)、siha-m、siha-i中ARID1A及磷酸化β-catenin的表达情况,结果显示,siha-m组中ARID1A的表达明显低于siha及siha-nc(m)组;而siha-i组中ARID1A的表达明显高于siha及siha-nc(i)组;siha-m组中磷酸化β-catenin的表达明显低于siha及siha-nc(m)组,而siha-i组与siha、siha-nc(i)组之间磷酸化P-catenin的表达无明显差异。 (2)在宫颈癌细胞株siha中,转染构建质粒pscicheck2/ARID1A及miR221mimic,对siha(blank)、miR221NC-lu、miR221mi-luc三组利用双荧光素酶报告分析方法检测各组细胞中荧光素酶活性,结果显示,同时转染了pscicheck2/ARID1A及miR221mimic的miR221mi-luc组的荧光素酶活性明显低于blan、miR221NC-luc组(=635.4,P<0.001),blank及miR221NC-luc组之间无统计学差异。 3.miR221与上游转录因子twist2之间作用的鉴定 3.1twist2对miR221促进宫颈癌侵袭转移行为的调控 (1)利用qPCR检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2i、 sihashtw2-m中EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,以siha组为对照,经单因素方差分析检测,结果显示五组间E-CAD、N-CAD、Vimentin的表达具有显著差异(F=221.991,P<0.001;F=369.073,P<0.001;F=404.261,P<0.001);对5组间进行两两比较,结果显示,E-CAD在sihatw2-i(转染了miR221inhibitor)中的表达明显高于sihatw2组,而N-CAD及Vimentin表达明显下降;E-CAD在sihashtw2-m(转染了miR221mimic)中的表达明显低于sihashtw2组,而N-CAD及Vimentin表达明显上升。 (2)利用westernblot检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2-i、 sihashtw2-m中EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,结果提示:E-CAD在过表达miR221组sihashtw2-m中的表达明显低于sihashtw2,而N-CAD及Vimentin的表达明显增高;相反,E-CAD在沉默miR-221组sihatw2-i的表达较siha及sihatw2明显增高,而N-CAD及Vimentin的表达明显降低。 (3)利用划痕实验检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2-i、sihashtw2-m不同组中宫颈癌细胞的迁移能力,结果显示,sihashtw2-m组的细胞迁移能力明显高于sihashtw2组,而sihatw2-i组的细胞迁移能力明显低于sihatw2。 (4)利用Borden侵袭小室检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2-i、 sihashtw2-m不同组之间细胞的体外侵袭能力变化,统计结果显示,5组之间细胞的侵袭能力具有显著性差异。且sihashtw2-m组细胞穿膜数目比sihashtw2显著增多,而sihatw2-i组细胞穿膜数目比sihatw2显著减少。 3.2twist2与miR221直接作用的验证 (1)通过Ensembl数据库,在线获得编码miR221序列上游2kb作为miR-221的启动子序列。 (2)利用三种在线软件(Mapper2,Consite及TRED)预测及分析可能与miR-221启动子结合的转录因子,并结合前期关于宫颈癌侵袭转移的相关研究,确定twist2作为miR-221的转录因子。 (3)利用双荧光素酶报告基因检测miR221启动子和转录因子twist2之间的荧光素酶活性,结果显示,当共同转染PGL3-basic/221和pcDNA3.1/tw2时,共同转染组(tw2+PGL3-221)较单独转染PGL3-221组及blank组荧光素酶活性显著增强,表明twist2能明显促进miR-221启动子的转录活性(F=130,P<0.001)。 结论 1、成功筛选出与宫颈癌侵袭转移因子twist2相关的8个miRNA,通过在细胞株siha、siha-tw2、siha-shtw2中验证得出miR221、miR221*、miR502-3p的差异性表达与芯片结果相符,其中,miR221差异性表达最明显。 2、miR-221可能通过靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞的侵袭转移。 3、twist2正性调控miR221的表达,促进其在宫颈癌侵袭转移中的作用。 4、提出一个新的调控机制,即miR-221在twist2转录因子的正性调控下可能通过ARID1A及wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌的侵袭和转移。 本项目的创新之处 1、已发现miR221在多种肿瘤发生发展中起促进作用,而其与宫颈癌侵袭转移的关系尚未见报道。 2、提出了一个新的miR221表达调控机制,选题具有很好的原始创新性和鲜明的研究特色。 3、阐明twist2/miR221/ARID1A在宫颈癌侵袭和转移中的作用机制,将为肿瘤转移的诊治、预后及药物筛选提供新的基因和miRNA靶点。

基于深度学习的宫颈癌肿瘤分割方法研究

这是一篇关于宫颈癌,图像分割,全局局部级联,半监督学习,影像分割系统的论文, 主要内容为宫颈癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,从磁共振影像中精准确定肿瘤的位置对于后续临床诊断和治疗非常关键。随着深度学习技术的快速兴起,许多方法在医学图像分割任务上取得了不错的效果。由于医学图像本身的异质性,现有分割方法主要存在以下问题:(1)宫颈癌肿瘤尺寸非常小,现有方法容易遗漏这些小目标;(2)肿瘤在磁共振影像的不同切片上尺寸变化大,现有方法的分割结果缺乏连续性和一致性;(3)磁共振影像标注困难,有标签的宫颈癌肿瘤数据集很少。本文针对上述问题进行了研究,具体工作主要分为以下几点:(1)提出一种基于全局局部级联的分割方法——GLC-Net,能有效解决以宫颈癌肿瘤为代表的小目标分割问题。为了有效融合图像的多尺度全局特征,提出全局特征融合模块;针对局部特征在下采样和卷积过程中容易丢失的问题,提出特征分解重组模块;另外设计通道空间注意力模块,使特征聚焦于特定的目标。为了测试所提方法的分割效果,设计了一系列对比实验和消融实验。结果表明,方法在定量指标和视觉效果上均取得了令人满意的效果。(2)提出一种基于切片间交互的半监督分割方法——SISMIS-Net,只需少量有标签切片就能训练模型,进而解决因图像标注困难导致训练样本过少的问题。首先使用分段仿射变换进行数据增强,然后使用部分切片训练粗分割模型GLC-Net。之后对粗分割结果使用基于切片间交互的形态学变换,生成软标签。最后提出基于空间连续性的半监督分割模型实现精细分割,使用软标签或真实标签进行监督。通过对比实验和消融实验的结果分析,验证了所提方法的有效性。(3)为了进一步探索医学图像分割算法的临床应用价值,本文基于所提出的分割模型,构建一个医学影像分割系统。系统为分割算法提供可视化操作界面,主要包含用户管理、影像上传和影像分割等功能。

MicroRNA-221在宫颈癌侵袭和转移中的分子调控机制研究

这是一篇关于Twist2,miR-221,ARID1A,宫颈癌,侵袭转移的论文, 主要内容为研究背景和目的 宫颈癌是妇女生殖系统中最常见的恶性肿瘤。近年国外报道在普通人群中宫颈癌的发病率有所下降,但在发展中国家尤其在我国,由于HPV感染增多、筛查程序的混乱等,宫颈癌的发病率和死亡率反而增加并有年轻化倾向。虽然筛查和手术联合综合治疗的防治模式已有效改善早期宫颈癌的预后,但转移、复发的宫颈癌却很难达到彻底根治,也是患者死亡的主要危险因素。因而,加强宫颈癌侵袭进展机制的基础研究,阐明宫颈癌转移的分子机制,对宫颈癌转移进行早期预测、诊断和预后评估及对于提高宫颈癌治愈率,降低死亡率具有重要科学意义,文献报道人类癌症中存在miRNAs的异常表达,50%以上的人类miRNAs位于肿瘤相关基因区域,例如脆性位点、杂合子丢失区或靠近癌基因、抑癌基因的部位,易于发生缺失、扩增或转位等。因此,,miRNAs可能通过靶向调控特定的癌基因或抑癌基因而在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。同时,miRNAs还受上游转录因子的调控,这样从上到下构成复杂的调控网络进一步调节肿瘤的发生发展,miRNAs与宫颈癌关系的报道近年来逐渐增多,在宫颈癌侵袭转移的过程中具有重要作用。 本文利用miRNA芯片在稳定细胞株中(siha-twist2及siha-shtwist2)筛选出与宫颈癌侵袭转移因子twist2密切相关的niRNA221,明确其在宫颈癌侵袭转移中的作用机制。本文的研究目的如下: 1.宫颈癌侵袭转移相关miRNA的筛选及验证; 2.miR221通过靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌侵袭转移中的作用; 3.miR221与上游转录因子twist2之间作用的鉴定。 研究方法 1.宫颈癌侵袭转移相关niRNA的筛选及功能验证 1.1利用稳筛细胞株(siha-twist2及siha-shtwist2)及miRNA芯片筛选与宫颈癌侵袭转移因子twist2相关的miRNA并通过荧光定量PCR法(qPCR)验证芯片结果。 1.2利用qPCR、westernblot、划痕实验及Borden侵袭小室实验对miRNA221在宫颈癌细胞侵袭转移行为中的作用进行验证。 2. miR221通过靶基因ARID1A及wnt/p-catenin信号通路在宫颈癌侵袭转移中的作用 2.1选取10个常用的miRNA靶基因预测软件DIANAmT、miRanda、miRDB、 miRWalk、RNAhybrid、PICTAR4、PICTAR5、PITA、RNA22、Targetscan对miRNA221的下游靶基因进行预测;利用NIAID/NIH提供的DAVID6.7分析平台并结合Biocarta pathway和KEGG pathway软件对miR-221的下游靶基因进行了功能聚类及信号通路分析。 2.2利用westernblot、载体构建及双荧光素酶报告分析实验对miRNA221下游靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路的调控进行验证。 3.miR221与上游转录因子twist2之间作用的鉴定 3.1利用qPCR、westernblot、划痕实验及Borden侵袭小室实验对上游转录因子twist2调控niRNA221诱导宫颈癌细胞侵袭转移行为进行探讨。 3.2利用载体构建及双荧光素酶报告分析实验对miRNA221与上游转录因子twist2之间直接作用进行验证。 研究结果 1.宫颈癌侵袭转移相关miRNA的筛选及功能验证 1.1宫颈癌侵袭转移相关miRNA的筛选 利用配对细胞株siha、siha-tw2、siha-shtw2送检芯片,结果提示8个差异性表达最明显的1nicroRNA,其中包括miRNA221;利用实时荧光定量PCR(qPCR)在配对细胞株中检测差异表达明显的microRNA,对芯片结果进行验证,2-△△CT值通过单因素方差分析结果显示:miRNA221差异性表达明显(F=64.64,P<0.001),进一步在宫颈癌组织中检测miRNA221的表达,发现宫颈癌组织中miRNA221的表达与twist2的表达呈正相关,与芯片结果相符(F0.70,F=24.75,P<0.001)。 1.2miR221对宫颈癌细胞侵袭转移行为的影响 (1)利用qPCR检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、siha-m、siha-i中miR221及EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,以siha组为对照,经单因素方差分析检测,结果显示五组间E-CAD、N-CAD、Vimentin的表达具有显著差异(F=34.1,P<0.001;F=27.026,P<0.001;F=17,P<0.001);对5组间进行两两比较,结果显示,miR-221在siha-m中的表达明显高于siha及siha-nc(m)组,且EMT相关标记物E-CAD表达明显降低,而N-CAD及Vimentin表达明显上升;miR-221在siha-i中的表达明显低于siha及siha-nc(i)组,EMT相关标记物E-CAD表达明显升高,而N-CAD及Vimentin表达明显下降。 (2)利用westemblot检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、siha-m、 siha-i中EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,结果显示,在宫颈癌siha细胞中,E-CAD在过表达niR221组siha-m中的表达明显低于siha及siha-nc(m),而N-CAD及Vimentin的表达明显增高;相反,E-CAD在沉默miR-221组siha-i的表达明显增高,而N-CAD及Vimentin的表达明显降低。 (3)利用划痕实验检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、siha-m、 siha-i不同组中宫颈癌细胞的迁移能力,结果显示,siha-m组的细胞迁移能力明显高于siha、siha-nc(m)组,而siha-i组的细胞迁移能力明显低于siha、siha-nc(i)。 (4)利用Borden侵袭小室检测宫颈癌细胞株siha、siha-nc(m)、siha-nc(i)、 siha-m、siha-i不同组之间细胞的体外侵袭能力变化,统计结果显示,5组之间细胞的侵袭能力具有显著性差异。且siha-m组细胞穿膜数目比siha、siha-nc(m)显著增多,而siha-i组细胞穿膜数目比siha、siha-nc(i)显著减少。 2.miR221通过靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌侵袭转移中的作用 2.1miR221下游靶基因及信号通路的预测 (1)miR221下游靶基因的生物信息学预测 选取10个常用的niRNA靶基因预测软件DIANAmT、miRanda、miRDB、 miRWalk、RNAhybrid、PICTAR4、PICTAR5、PITA、RNA22、Targetscan对miR-221的靶基因进行预测,ARID1A基因的预测值最高,于是我们选择ARID1A作为miR-221的靶基因。并对靶基因ARID1A进行实验鉴定。 (2)MiR221下游信号通路的生物信息学预测 利用NIAID/NIH提供的DAVID6.7分析平台并结合Biocarta pathway和KEGG pathway软件对miR-221的下游靶基因进行了功能聚类及信号通路分析,结果显示wnt/β-catenin信号通路的预测频率最高。 2.2miR221对下游靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路的调控 (1)利用westernblot检测宫颈癌细胞株siha不同处理组siha、siha-nc(m)、 siha-nc(i)、siha-m、siha-i中ARID1A及磷酸化β-catenin的表达情况,结果显示,siha-m组中ARID1A的表达明显低于siha及siha-nc(m)组;而siha-i组中ARID1A的表达明显高于siha及siha-nc(i)组;siha-m组中磷酸化β-catenin的表达明显低于siha及siha-nc(m)组,而siha-i组与siha、siha-nc(i)组之间磷酸化P-catenin的表达无明显差异。 (2)在宫颈癌细胞株siha中,转染构建质粒pscicheck2/ARID1A及miR221mimic,对siha(blank)、miR221NC-lu、miR221mi-luc三组利用双荧光素酶报告分析方法检测各组细胞中荧光素酶活性,结果显示,同时转染了pscicheck2/ARID1A及miR221mimic的miR221mi-luc组的荧光素酶活性明显低于blan、miR221NC-luc组(=635.4,P<0.001),blank及miR221NC-luc组之间无统计学差异。 3.miR221与上游转录因子twist2之间作用的鉴定 3.1twist2对miR221促进宫颈癌侵袭转移行为的调控 (1)利用qPCR检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2i、 sihashtw2-m中EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,以siha组为对照,经单因素方差分析检测,结果显示五组间E-CAD、N-CAD、Vimentin的表达具有显著差异(F=221.991,P<0.001;F=369.073,P<0.001;F=404.261,P<0.001);对5组间进行两两比较,结果显示,E-CAD在sihatw2-i(转染了miR221inhibitor)中的表达明显高于sihatw2组,而N-CAD及Vimentin表达明显下降;E-CAD在sihashtw2-m(转染了miR221mimic)中的表达明显低于sihashtw2组,而N-CAD及Vimentin表达明显上升。 (2)利用westernblot检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2-i、 sihashtw2-m中EMT相关标记物(E-CAD、N-CAD、Vimentin)的表达,结果提示:E-CAD在过表达miR221组sihashtw2-m中的表达明显低于sihashtw2,而N-CAD及Vimentin的表达明显增高;相反,E-CAD在沉默miR-221组sihatw2-i的表达较siha及sihatw2明显增高,而N-CAD及Vimentin的表达明显降低。 (3)利用划痕实验检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2-i、sihashtw2-m不同组中宫颈癌细胞的迁移能力,结果显示,sihashtw2-m组的细胞迁移能力明显高于sihashtw2组,而sihatw2-i组的细胞迁移能力明显低于sihatw2。 (4)利用Borden侵袭小室检测宫颈癌细胞株siha、sihatw2、sihashtw2、sihatw2-i、 sihashtw2-m不同组之间细胞的体外侵袭能力变化,统计结果显示,5组之间细胞的侵袭能力具有显著性差异。且sihashtw2-m组细胞穿膜数目比sihashtw2显著增多,而sihatw2-i组细胞穿膜数目比sihatw2显著减少。 3.2twist2与miR221直接作用的验证 (1)通过Ensembl数据库,在线获得编码miR221序列上游2kb作为miR-221的启动子序列。 (2)利用三种在线软件(Mapper2,Consite及TRED)预测及分析可能与miR-221启动子结合的转录因子,并结合前期关于宫颈癌侵袭转移的相关研究,确定twist2作为miR-221的转录因子。 (3)利用双荧光素酶报告基因检测miR221启动子和转录因子twist2之间的荧光素酶活性,结果显示,当共同转染PGL3-basic/221和pcDNA3.1/tw2时,共同转染组(tw2+PGL3-221)较单独转染PGL3-221组及blank组荧光素酶活性显著增强,表明twist2能明显促进miR-221启动子的转录活性(F=130,P<0.001)。 结论 1、成功筛选出与宫颈癌侵袭转移因子twist2相关的8个miRNA,通过在细胞株siha、siha-tw2、siha-shtw2中验证得出miR221、miR221*、miR502-3p的差异性表达与芯片结果相符,其中,miR221差异性表达最明显。 2、miR-221可能通过靶基因ARID1A及wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞的侵袭转移。 3、twist2正性调控miR221的表达,促进其在宫颈癌侵袭转移中的作用。 4、提出一个新的调控机制,即miR-221在twist2转录因子的正性调控下可能通过ARID1A及wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌的侵袭和转移。 本项目的创新之处 1、已发现miR221在多种肿瘤发生发展中起促进作用,而其与宫颈癌侵袭转移的关系尚未见报道。 2、提出了一个新的miR221表达调控机制,选题具有很好的原始创新性和鲜明的研究特色。 3、阐明twist2/miR221/ARID1A在宫颈癌侵袭和转移中的作用机制,将为肿瘤转移的诊治、预后及药物筛选提供新的基因和miRNA靶点。

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